rRNA作為總RNA中豐富的成員，提供的轉(zhuǎn)錄本信息卻少之又少，且檢測(cè)過(guò)多會(huì)掩蓋其它基因的表達(dá)豐度，從而增加低豐度轉(zhuǎn)錄本的檢測(cè)難度。因此，通常在測(cè)序之前從總RNA樣品中去除rRNA，rRNA去除的效率也被視為z大化讀取到轉(zhuǎn)錄物的關(guān)鍵因素。 rRNA去除試劑盒適用于快速提取植物組織RNA，使用*的裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞RNA酶，然后用乙醇調(diào)節(jié)結(jié)合條件后，RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，DNase直接在柱上消化殘留DNA，再通過(guò)一系列快速的漂洗－離心的步驟, 去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)去除， 最后低鹽的RNase free H20將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。
rRNA去除試劑盒使用注意事項(xiàng)：
1. 所有的離心步驟均可在室溫完成,使用可容納五十ml 離心管的離心機(jī)。
2. 需要自備乙醇,一次性注射器(可選),研缽。
3. 裂解液RLT 和裂解液RLT Plus和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作時(shí)要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí),需要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
4. 植物組織裂解是否充分直接影響到RNA 提取的質(zhì)量和產(chǎn)量,本試劑盒中提供的裂解液RLT,主要成分為異硫氰酸胍,適用于大多數(shù)植物組織的裂解,但有些植物組織(例如玉米的乳白色胚乳)或絲狀真菌,由于次級(jí)代謝產(chǎn)物較特殊,異硫氰酸胍使樣品產(chǎn)生固化,導(dǎo)致RNA 無(wú)法提取,此時(shí)可以向我們索取另一種裂解液RLC,將解決該問(wèn)題。
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